Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibromodulin (h): sc-401610

Présentation

FMOD code la fibromoduline, un petit protéoglycane riche en leucines de la matrice extracellulaire qui se lie aux fibrilles de collagène et contribue à réguler la fibrillogenèse, l’architecture de la matrice et les propriétés mécaniques des tissus. La fibromoduline module la signalisation des facteurs de croissance, notamment via des interactions avec les voies de la famille TGF-β, et participe à la communication cellule–matrice en influençant l’adhésion, la migration et les programmes de réparation des plaies. Une expression altérée de FMOD ou une organisation perturbée de la MEC ont été associées à un remodelage fibrotique et à des réponses stromales dérégulées dans de nombreux tissus. En tant que composant matriciel influençant le dépôt de collagène et la disponibilité des signaux, FMOD est fréquemment étudié en biologie des tissus conjonctifs, dans le remodelage associé à l’inflammation et dans la recherche sur le microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibromodulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FMOD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FMOD, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FMOD à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Fibromodulin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FMOD pour l'étude de la signalisation de Fibromodulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FMOD essentiels à la fonction de Fibromodulin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FMOD pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Fibromodulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Fibromodulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FMOD. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Fibromodulin plasmide HDR (h) et le Fibromodulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FMOD pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FMOD définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.