Plasmide CRISPR/Cas9 KO fibrillin-2 (h): sc-406714
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- fibrillin-2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique fibrillin-2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: fibrillin-2 Antibody (H-10): sc-393968
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO fibrillin-2 (h) | sc-406714 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
FBN2 code la fibrilline‑2, une grande glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui polymérise en microfibrilles et contribue à l’assemblage des fibres élastiques ainsi qu’à l’architecture du tissu conjonctif. Les microfibrilles contenant la fibrilline‑2 apportent un soutien structurel et régulent la biodisponibilité des facteurs de croissance, influençant des voies de signalisation telles que TGF‑β et BMP qui gouvernent la morphogenèse et l’homéostasie tissulaire. Par ses interactions avec les intégrines et des protéines associées à la matrice, la fibrilline‑2 module l’adhésion cellulaire, la mécanotransduction et le remodelage de la matrice extracellulaire. Des altérations génétiques de FBN2 sont associées à des phénotypes congénitaux du tissu conjonctif, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie du développement de la matrice et des dérégulations de la signalisation des facteurs de croissance.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO fibrillin-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FBN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FBN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FBN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine fibrillin-2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FBN2 pour l'étude de la signalisation de fibrillin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de FBN2 essentiels à la fonction de fibrillin-2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FBN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le fibrillin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le fibrillin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FBN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le fibrillin-2 plasmide HDR (h) et le fibrillin-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FBN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FBN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.