FGF-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403127
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- FGF-8 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im FGF-8-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FGF-8: sc-293479
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FGF-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-403127 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
FGF8 kodiert den Fibroblasten-Wachstumsfaktor 8 (FGF-8), einen sezernierten Signalliganden, der an Rezeptoren der FGFR-Familie bindet und so die embryonale Musterbildung, die Gewebemorphogenese sowie Entscheidungen über Zellschicksale reguliert. FGF-8 aktiviert kanonische RTK-Signalwege, darunter RAS–MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und PLCγ-Signaling, und beeinflusst dabei kontextabhängig Programme der Proliferation, Migration und Differenzierung. Eine fehlregulierte FGF8-Expression und eine veränderte Aktivität des FGFR-Signalwegs wurden mit Entwicklungsstörungen sowie mit onkogenen Signalnetzwerken in mehreren Tumorarten in Verbindung gebracht, wobei veränderte Wachstumsfaktor-Signalgebung Linienprogramme und Interaktionen mit dem Mikromilieu umgestalten kann. In der Forschung wird FGF8 häufig aufgrund seiner Funktionen in der Entwicklungsbiologie, in wachstumsfaktorabhängigen Transkriptionsprogrammen und im Crosstalk von Signalwegen untersucht, die die Gewebehomöostase steuern.
Das FGF-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FGF8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FGF8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FGF8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FGF-8-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FGF8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FGF-8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf FGF8-Exone abzielen, die für die FGF-8-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere FGF8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom FGF-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FGF-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FGF8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FGF-8 HDR-Plasmid (h) und FGF-8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FGF8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FGF8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.