FGF-13 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-420327-LAC-2

Das Mausgen Fgf13 kodiert den Fibroblasten-Wachstumsfaktor 13 (FGF-13), ein intrazelluläres Mitglied der FGF-Familie, das primär als Regulator der Erregbarkeit und der zytoskelettalen Organisation wirkt und nicht als sekretierter Wachstumsfaktor. FGF-13 moduliert das Trafficking und die Gating-Eigenschaften spannungsabhängiger Natriumkanäle, beeinflusst dadurch die Initiation und Weiterleitung von Aktionspotenzialen in Neuronen und Kardiomyozyten und trägt während der Entwicklung zur mikrotubulusabhängigen Polarisierung und neuronalen Migration bei. Über seine Funktionen in der Ionenkanalregulation und der Ausbildung neuronaler Schaltkreise ist Fgf13 für Studien zu neuroentwicklungsbezogenen und anfallsassoziierten Phänotypen sowie zu Störungen der kardialen Erregungsleitung relevant. Die Geneditierung von Fgf13 in Mausmodellen ermöglicht eine mechanistische Analyse von Kanalopathien, aktivitätsabhängiger Signalgebung und der Morphogenese von Axonen und Dendriten mithilfe von Elektrophysiologie, Bildgebung und transkriptomischem Profiling.

FGF-13 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Fgf13-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

FGF-13 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Fgf13-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen FGF-13-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Fgf13-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.