FGF-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-416438-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FGF-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FGF-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und FGF-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FGF1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FGF-1: sc-55520
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FGF-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416438-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FGF-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416438-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FGF1 kodiert den Fibroblasten-Wachstumsfaktor 1 (FGF-1), einen pleiotropen Mitogen, der Proliferation, Überleben, Migration und Differenzierung in zahlreichen Zelltypen reguliert, darunter Endothelzellen, Fibroblasten und neuronale Linien. FGF-1 signalisiert hauptsächlich über FGFR-Tyrosinkinasen und aktiviert dabei MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und PLCγ-Signalwege, wodurch angiogene Antworten, Umbau der extrazellulären Matrix und wundassoziierte Programme koordiniert werden. Eine fehlregulierte FGF1–FGFR-Signalgebung wurde mit aberrantem vaskulärem Remodeling und wachstumsfaktorgetriebenen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Onkologie sowie metabolische und entzündliche Erkrankungen relevant sind. Die FGF-1-Aktivität steht zudem mit Stressantwort und Gewebehomöostase in Zusammenhang, wodurch FGF1 einen hilfreichen Knotenpunkt darstellt, um Signalweg-Crosstalk und kontextabhängige Wachstumskontrolle zu untersuchen.
FGF-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FGF1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FGF1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FGF1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FGF1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.