FGD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407854-ACT

FGD3 (proteína 3 contendo domínios FYVE, RhoGEF e PH) é um fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) para Rho que ativa preferencialmente a CDC42 para regular a remodelação do citoesqueleto de actina, o tráfego de membranas e a migração celular polarizada. Ao acoplar o reconhecimento de fosfoinositídeos à sinalização de pequenas GTPases, a FGD3 influencia processos como a dinâmica de lamelipódios/filopódios, a adesão célula–célula e programas morfogenéticos em tecidos epiteliais. Alterações na expressão de FGD3 têm sido associadas a mudanças no comportamento invasivo e no potencial metastático em diferentes contextos tumorais, tornando-a um nó útil para estudar fenótipos impulsionados pelo citoesqueleto. Sua conectividade em vias de sinalização sustenta pesquisas sobre sinalização dependente de CDC42, regulação endocítica e programas transcricionais associados à diferenciação e à motilidade.

FGD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGD3 em células tumorais com expressão de FGD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.