Plasmide CRISPR d'Activation (h) FEZF2: sc-406571-ACT

FEZF2 (FEZ family zinc finger 2) code un facteur de transcription qui joue un rôle central dans le neurodéveloppement en orientant l’identité des neurones corticaux de projection et en régulant des programmes de différenciation neuronale, de guidage axonal et de connectivité corticothalamique. Grâce à ses domaines « zinc finger » de liaison à l’ADN, FEZF2 coordonne des réseaux de régulation génique qui façonnent la structuration du télencéphale et la maturation des lignées neuronales excitatrices, en s’articulant avec les signalisations du développement et le contrôle transcriptionnel dépendant de la chromatine. Une régulation altérée de FEZF2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et est étudiée dans le contexte d’une formation dysrégulée des circuits neuronaux, pertinente pour des troubles cérébraux complexes.

FEZF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FEZF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FEZF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FEZF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FEZF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FEZF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FEZF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FEZF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FEZF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FEZF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.