Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fes (h): sc-403246

Présentation

FES code Fes, une tyrosine kinase cytoplasmique non réceptrice, exprimée principalement dans les lignées hématopoïétiques et myéloïdes, où elle couple les signaux issus des récepteurs à des cascades de phosphorylation en aval. Fes participe à des réseaux de signalisation qui régulent la différenciation, le remodelage du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et les fonctions de l’immunité innée, en intégrant des signaux provenant des voies des cytokines et des facteurs de croissance. Par l’intermédiaire de ses domaines SH2 et kinase, Fes module des substrats impliqués dans la dynamique de l’actine et des programmes transcriptionnels qui façonnent le développement des leucocytes et les réponses inflammatoires. Une signalisation et une expression dérégulées de FES ont été étudiées dans la biologie des hémopathies malignes et dans des contextes d’activation myéloïde aberrante, ce qui en fait un nœud pertinent pour disséquer les circuits de signalisation dépendants des kinases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Fes (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FES dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FES, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FES à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Fes.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FES pour l'étude de la signalisation de Fes, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FES essentiels à la fonction de Fes
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FES pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Fes plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Fes plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FES. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Fes plasmide HDR (h) et le Fes (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FES pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FES définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.