Ferroportin-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-424774-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ferroportin-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ferroportin-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Ferroportin-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc40a1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ferroportin-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424774-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc40a1 kodiert Ferroportin-1, den wichtigsten zellulären Eisenexporter, der die systemische und gewebespezifische Eisenverteilung steuert, indem er den Efflux von Fe²⁺ aus Enterozyten, Makrophagen, Hepatozyten und Plazentazellen vermittelt. Die Ferroportin-Aktivität wird streng über die Hepcidin–Ferroportin-Achse reguliert: Die Bindung von Hepcidin löst die Internalisierung und den Abbau von Ferroportin aus und verknüpft so den Eisenfluss mit entzündlichen und metabolischen Signalen. Über seinen Einfluss auf die Eisenverfügbarkeit wirkt Ferroportin-1 auf die Erythropoese, die mitochondriale Funktion, Antworten auf oxidativen Stress und das Eisenrecycling in Makrophagen. Eine Fehlregulation der Slc40a1-abhängigen Eisenhandhabung ist sowohl für Eisenüberladung als auch für Zustände mit eingeschränkter Eisenverfügbarkeit relevant und wird häufig in Studien zu Anämie bei Entzündung, hepatischem Eisenstoffwechsel, Infektionsbiologie und Neuroinflammation modelliert.
Ferroportin-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc40a1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc40a1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc40a1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc40a1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.