Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Ferroportin-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400872-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ferroportin-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ferroportin-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Ferroportin-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC40A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ferroportin-1: sc-518125
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ferroportin-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400872-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ferroportin-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400872-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC40A1 kodiert Ferroportin-1, den wichtigsten zellulären Eisenexporter, der die systemische und lokale Eisenverfügbarkeit reguliert, indem er zweiwertiges Eisen über die Plasmamembran transportiert. Die Funktion von Ferroportin-1 ist mit der hepcidinvermittelten Bindung, Internalisierung und dem Abbau koordiniert, wodurch SLC40A1 mit Signalwegen der Eisenhomöostase, dem Eisenrecycling in Makrophagen und der intestinalen Eisenaufnahme verknüpft ist. Eine veränderte SLC40A1-Aktivität stört die Ferritinspeicherung, die Transferrinsättigung und die Reaktionen auf oxidativen Stress, was für Eisenüberladungs-Phänotypen und anämieassoziierte Mechanismen relevant ist. Darüber hinaus beeinflusst Ferroportin-1 entzündliche Signalwege und den mitochondrialen Stoffwechsel indirekt über eisenabhängige enzymatische und redoxbasierte Prozesse.
Ferroportin-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC40A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC40A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC40A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC40A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.