Ferrochelatase Double Nickaseプラスミド (h): sc-402043-NIC

ヒトのFECHはフェロケラターゼをコードしており、これはヘム生合成の最終酵素として、ミトコンドリアマトリックス内でプロトポルフィリンIXに二価鉄（Fe²⁺）を挿入してヘムを形成します。この活性は、ヘモグロビン、ミオグロビン、シトクロム、カタラーゼ、一酸化窒素合成酵素などのヘム補欠分子族を供給することで酸化的代謝を支えます。FECHの機能はミトコンドリアの鉄取り扱い、ポルフィリン代謝、レドックス恒常性と統合されており、細胞呼吸および活性酸素種（ROS）の制御において中心的な役割を担います。FECHの制御異常はポルフィリンの蓄積やヘム欠乏の表現型と関連し、赤芽球性プロトポルフィリン症などの遺伝性ポルフィリン症を含めて、貧血、ミトコンドリア機能不全、光過敏に伴う細胞ストレスといった文脈で研究されています。

Ferrochelatase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FECH 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FECH内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FECHの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FECHが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。