Ferrochelatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402043

Übersicht

FECH kodiert die menschliche Ferrochelatase, ein Enzym der inneren Mitochondrienmembran, das den Einbau von zweiwertigem Eisen (Fe²⁺) in Protoporphyrin IX katalysiert und so Häm bildet – den letzten Schritt der Porphyrin-/Häm-Biosynthese. Indem Ferrochelatase die Verfügbarkeit von Häm steuert, beeinflusst sie die erythroide Reifung, die mitochondriale Atmung, das Redoxgleichgewicht und die Assemblierung von Hämproteinen. Eine Störung der FECH-Aktivität ist mit einer Anreicherung von Porphyrinen und einer veränderten Häm-Homöostase verbunden, was für die erythropoetische Protoporphyrie und allgemeinere Phänotypen metabolischen Stresses in Zellen mit hohem Hämbedarf relevant ist. FECH wird daher in der mitochondrialen Biologie, der Eisenhandhabung und dem Porphyrinstoffwechsel breit untersucht, einschließlich der Reaktionen des Signalwegs auf oxidative und metabolische Störungen.

Das Ferrochelatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FECH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FECH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FECH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ferrochelatase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FECH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ferrochelatase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FECH-Exone abzielen, die für die Ferrochelatase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FECH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ferrochelatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ferrochelatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FECH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ferrochelatase HDR-Plasmid (h) und Ferrochelatase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FECH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FECH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.