Plasmide Double Nickase (h) ferritin light chain: sc-400924-NIC

FTL code la chaîne légère de la ferritine, une sous-unité essentielle du complexe de ferritine cytosolique qui séquestre l’excès de fer ferreux et limite les dommages oxydatifs catalysés par le fer. En contrôlant la disponibilité du fer labile, FTL contribue à l’homéostasie du fer, à l’équilibre rédox et à des processus en aval, notamment le métabolisme mitochondrial, la synthèse de l’ADN et les réponses au stress. La dynamique de la ferritine recoupe des voies qui régulent la sensibilité à la ferroptose, la signalisation inflammatoire et le renouvellement autophagique de la ferritine (ferritinophagie), reliant ainsi FTL à l’adaptation cellulaire en conditions de stress nutritionnel ou oxydatif. Une expression altérée de FTL ou une régulation anormale de la ferritine est fréquemment utilisée comme lecture moléculaire dans des études portant sur les états de surcharge en fer, les processus neurodégénératifs, la biologie des infections et le métabolisme des cellules cancéreuses.

ferritin light chain Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FTL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FTL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FTL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FTL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.