ferritin light chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400924

Übersicht

FTL kodiert die Ferritin-Leichtkette, einen zentralen Bestandteil des Ferritin-Heteropolymers, das Eisen sequestriert und mineralisiert, um die zelluläre Eisenhomöostase aufrechtzuerhalten und eisengetriebenen oxidativen Stress zu begrenzen. Durch das Puffern labiler Eisenpools beeinflusst FTL das Redoxgleichgewicht, die mitochondriale Funktion und eisenresponsive Signalwege über das IRP/IRE-Regulationsnetzwerk und koordiniert so Eisenspeicherung mit Eisenaufnahme und -verwertung. Eine veränderte Ferritin-Zusammensetzung oder -Expression kann die Empfindlichkeit gegenüber Ferroptose und die inflammatorische Stressantwort stören, indem sie die Eisenverfügbarkeit und die Neigung zur Lipidperoxidation verändert. Eine Dysregulation von FTL und der Ferritin-Biologie wurde mit Neurodegeneration, anämieassoziiertem Fehlmanagement von Eisen und krebsbedingtem metabolischem Remodeling in Verbindung gebracht, was FTL zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung eisenabhängiger zellulärer Phänotypen macht.

Das ferritin light chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FTL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FTL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FTL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ferritin light chain-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FTL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ferritin light chain-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FTL-Exone abzielen, die für die ferritin light chain-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FTL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ferritin light chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ferritin light chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FTL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ferritin light chain HDR-Plasmid (h) und ferritin light chain HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FTL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FTL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.