Plasmide CRISPR/Cas9 KO ferritin light chain (h): sc-400924

Présentation

FTL code la chaîne légère de la ferritine, un composant central de l’hétéropolymère de ferritine qui séquestre et minéralise le fer afin de maintenir l’homéostasie du fer cellulaire et de limiter le stress oxydatif induit par le fer. En tamponnant les pools de fer labile, FTL influence l’équilibre rédox, la fonction mitochondriale et la signalisation sensible au fer via le réseau régulateur IRP/IRE, coordonnant le stockage du fer avec son absorption et son utilisation. Des modifications de la composition ou de l’expression de la ferritine peuvent perturber la sensibilité à la ferroptose et les réponses au stress inflammatoire en modifiant la disponibilité du fer et la propension à la peroxydation lipidique. Une dérégulation de FTL et de la biologie de la ferritine a été associée à la neurodégénérescence, à une mauvaise gestion du fer liée à l’anémie et au remodelage métabolique associé au cancer, faisant de FTL un nœud utile pour l’étude de phénotypes cellulaires dépendants du fer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ferritin light chain (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FTL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FTL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FTL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ferritin light chain.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FTL pour l'étude de la signalisation de ferritin light chain, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FTL essentiels à la fonction de ferritin light chain
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FTL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ferritin light chain plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ferritin light chain plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FTL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ferritin light chain plasmide HDR (h) et le ferritin light chain (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FTL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FTL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.