Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fer: sc-402734-ACT

Le gène humain **FER** code Fer, une tyrosine kinase protéique non réceptrice de la famille FES/Fer, qui transmet des signaux en aval des récepteurs aux facteurs de croissance et des complexes d’adhérence. Fer participe au contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la dynamique du cytosquelette, de l’intégrité des jonctions cellule–cellule et de la motilité cellulaire via des voies impliquant la signalisation des intégrines, des complexes associés aux cadhérines et la régulation des GTPases de la famille Rho. En modulant les sorties de signalisation associées à MAPK et à PI3K/AKT, Fer contribue à coordonner les réponses de prolifération et de survie aux signaux extracellulaires. Une activité ou une expression dérégulée de **FER** a été associée à un comportement invasif altéré et à des réseaux de signalisation aberrants dans de multiples contextes pertinents en cancérologie, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans l’étude de la signalisation oncogénique et des phénotypes liés aux métastases.

Fer Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FER sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fer Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FER dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FER, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fer. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FER natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fer au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fer dans les cellules tumorales présentant une expression de FER silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.