FEN-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403168

Visão geral

FEN1 codifica a endonuclease de flap 1 (FEN-1), uma nuclease específica de estrutura que cliva intermediários de “flap” 5′ durante a maturação dos fragmentos de Okazaki e a reparação por excisão de bases de “long patch”. A FEN-1 atua em coordenação com a PCNA e com as polimerases de DNA para sustentar a fidelidade da replicação do DNA, o processamento de forquilhas de replicação estagnadas e a resolução de estruturas secundárias de DNA que podem desencadear instabilidade genómica. Por meio das suas funções nas respostas ao stress replicativo, na escolha de vias de reparação e na manutenção da integridade cromossómica, alterações na função de FEN1 estão associadas à acumulação de mutações e a assinaturas ligadas à biologia do cancro e à sensibilidade a danos no DNA. Assim, a FEN-1 é amplamente utilizada como ponto de entrada mecanístico para o estudo de redes de reparação do DNA, do processamento acoplado à replicação e da sinalização de checkpoints.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FEN-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FEN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FEN1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FEN1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FEN-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FEN1 para a investigação da sinalização de FEN-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FEN1 críticos para a função FEN-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FEN1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FEN-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo FEN-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FEN1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FEN-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR FEN-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FEN1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FEN1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.