Plásmido Doble Nickase (h) Fe65: sc-403226-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Fe65 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Fe65 (h) y el plásmido de doble nickasa Fe65 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a APBB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Fe65 Anticuerpo (F-6): sc-398389
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Fe65 | sc-403226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Fe65 | sc-403226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APBB1 codifica Fe65, una proteína adaptadora que se une a la cola citoplasmática de la proteína precursora del amiloide (APP) mediante sus dominios de unión a fosfotirosina y coordina complejos multiproteicos implicados en la señalización neuronal. Fe65 participa en el tráfico endocítico, la función sináptica y la regulación de la expresión génica a través de interacciones con la maquinaria de procesamiento de APP y corre\-guladores nucleares. Estas actividades conectan a APBB1 con vías que controlan la escisión de APP, la señalización intracelular y la transcripción dependiente de la actividad. Las interacciones alteradas Fe65–APP y la señalización aguas abajo se han estudiado en el contexto de la neurodegeneración y el procesamiento amiloidogénico, lo que respalda su relevancia en modelos mecanísticos de la enfermedad de Alzheimer y neuropatologías relacionadas.
Fe65 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APBB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APBB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APBB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APBB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.