FCM Fixation buffer (10X)

Flow Cytometry (FCM) Fixation Buffer (10X) ist ein wichtiges Reagenz, das in der immunologischen und zellbiologischen Forschung eingesetzt wird, insbesondere bei Durchflusszytometrie-Anwendungen. Dieser spezielle Puffer ist sorgfältig formuliert, um zelluläre Strukturen und antigene Epitope zu erhalten und so eine genaue und zuverlässige Analyse von Zellpopulationen zu ermöglichen. Die Zusammensetzung des FCM-Fixierpuffers (10X) enthält in der Regel Paraformaldehyd (PFA) als primäres Fixiermittel, zusammen mit anderen Bestandteilen wie Natriumphosphatpuffer und Saccharose. PFA reagiert mit zellulären Proteinen und bildet Querverbindungen, die zelluläre Strukturen immobilisieren und den Abbau oder die Veränderung antigener Epitope verhindern. Natriumphosphatpuffer sorgt für die pH-Stabilität der Lösung und gewährleistet so optimale Fixierungsbedingungen, während Saccharose dazu beiträgt, die zelluläre Osmolarität aufrechtzuerhalten und die Schrumpfung oder Quellung der Zellen während der Fixierung zu minimieren. Bei Durchflusszytometrie-Experimenten wird der FCM-Fixierpuffer (10X) verwendet, um zelluläre Prozesse zu stoppen und die Zellmorphologie und Proteinexpressionsmuster zu erhalten. Die Zellen werden zunächst mit dem Puffer behandelt, der die Zellmembran schnell durchdringt und intrazelluläre Proteine bei Kontakt vernetzt. Durch diesen Fixierungsschritt werden zelluläre Komponenten, einschließlich Antigenen, innerhalb der Zelle immobilisiert, so dass ihre räumliche Verteilung und relative Häufigkeit erhalten bleibt. Forscher setzen den FCM-Fixierpuffer (10X) in verschiedenen Anwendungen der Durchflusszytometrie ein, darunter Immunphänotypisierung, Zellzyklusanalyse und intrazelluläre Färbung. Nach der Fixierung können die Zellen permeabilisiert werden, um den Zugang von Antikörpern oder Fluoreszenzfarbstoffen zu intrazellulären Zielen zu ermöglichen, was eine multiparametrische Analyse der Proteinexpression und der zellulären Funktionen erlaubt. Die Optimierung der Fixierungsbedingungen, einschließlich der Pufferkonzentration, der Fixierungszeit und der Temperatur, ist für die Erzielung optimaler Ergebnisse bei durchflusszytometrischen Experimenten von entscheidender Bedeutung. Eine unsachgemäße Fixierung kann zur Verklumpung der Zellen, zum Verlust der Antigenität oder zur unspezifischen Bindung von Antikörpern führen, was sich negativ auf die Datenqualität und die Interpretation auswirkt.