Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Fc ε RIγ Double Nickase Plasmid (h): sc-417621-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Fc ε RIγ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Fc ε RIγ Double-Nickase-Plasmid (h) und Fc ε RIγ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FCER1G abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Fc ε RIγ: sc-390222
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Fc ε RIγ Double Nickase Plasmid (h) | sc-417621-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fc ε RIγ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417621-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FCER1G kodiert die Signaleinheit FcεRIγ, einen ITAM-tragenden Adapter, der mit mehreren Immunrezeptoren zusammenwirkt und so die Ligandenbindung mit intrazellulären Aktivierungskaskaden koppelt. In myeloiden Zellen und Mastzellen ist FcεRIγ an der Signalübertragung von Fc‑Rezeptoren und C‑Typ‑Lectin‑Rezeptoren beteiligt und fördert die Aktivierung von Src-/Syk-Kinasen, nachgeschaltete Calciumflüsse, MAPK-Signalwege sowie Transkriptionsprogramme, die Degranulation, Zytokinproduktion und phagozytische Antworten regulieren. Über diese Signalwege trägt FcεRIγ zur Ausprägung angeborener und antikörperabhängiger Effektorfunktionen bei und wird häufig im Kontext allergischer Entzündungen, der Infektionsbiologie und von Immunfehlregulation untersucht. Veränderte Expression oder Signalweiterleitung über FcεRIγ-assoziierte Rezeptorkomplexe wurde mit entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht und bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt, um Aktivierungszustände von Immunzellen zu analysieren.
Fc ε RIγ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FCER1G-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FCER1G abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FCER1G-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FCER1G-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.