FBXW2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406409

Übersicht

FBXW2 kodiert ein F‑Box‑ und WD‑Repeat‑haltiges Protein, das als Substraterkennungskomponente von SCF‑(SKP1–CUL1–F‑Box‑)E3‑Ubiquitinligase-Komplexen fungiert und dabei hilft, spezifische Proteine zur Ubiquitinierung und zum proteasomalen Abbau zu dirigieren. Durch den regulierten Abbau von Signal- und Zellzyklus-assoziierten Faktoren trägt FBXW2 zur Proteostase und zur Feinabstimmung von Signalwegen bei, die Proliferation, Differenzierung und Stressantworten steuern. Eine veränderte Ubiquitin-vermittelte Regulation ist ein häufiges Merkmal onkogener Signalgebung und anderer Erkrankungen mit gestörter Proteinhomöostase, wodurch FBXW2 einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen der Umverdrahtung von Signalwegen darstellt. FBXW2 ist daher von Interesse, um zu untersuchen, wie zielgerichtete Abbauprogramme den zellulären Phänotyp in krankheitsrelevanten Kontexten beeinflussen.

Das FBXW2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FBXW2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FBXW2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FBXW2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FBXW2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FBXW2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FBXW2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FBXW2-Exone abzielen, die für die FBXW2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FBXW2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FBXW2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FBXW2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FBXW2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FBXW2 HDR-Plasmid (h) und FBXW2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FBXW2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FBXW2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.