Plasmide CRISPR d'Activation (h2) FBXO6: sc-405919-ACT-2

Le gène humain FBXO6 code une protéine à boîte F qui sert de composant de reconnaissance des substrats au sein des complexes ligases E3 d’ubiquitine de type SCF (SKP1–CUL1–RBX1), reliant les protéines cibles à l’ubiquitinylation et à leur dégradation par le protéasome. FBXO6 est surtout caractérisée dans la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), où elle reconnaît des glycoprotéines mal repliées via des interactions de type lectine et favorise leur élimination, influençant ainsi la protéostasie, la signalisation du stress du réticulum endoplasmique et le contrôle qualité des protéines sécrétées et membranaires. Par ces fonctions, FBXO6 s’inscrit au croisement de voies qui régulent le repliement des protéines, la régulation dépendante de l’ubiquitine et les réponses cellulaires au stress, avec des liens rapportés avec la biologie du cancer, des phénotypes métaboliques et inflammatoires, ainsi que des troubles associés à une homéostasie protéique altérée. L’édition génomique ou la perturbation de FBXO6 permet des études mécanistiques de la spécificité des substrats au sein des ligases SCF, de la dynamique de l’ERAD et des conséquences transcriptionnelles et de signalisation en aval d’un contrôle qualité protéique médié par l’ubiquitine modifié dans des modèles de cellules humaines.

FBXO6 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FBXO6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FBXO6 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FBXO6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FBXO6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FBXO6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FBXO6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FBXO6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FBXO6 dans les cellules tumorales présentant une expression de FBXO6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.