Plasmide CRISPR d'Activation (h) FBP2: sc-404139-ACT

KHSRP code la protéine régulatrice de l’épissage de type KH (FBP2), un facteur liant l’ARN qui coordonne la régulation génique post‑transcriptionnelle en contrôlant l’épissage du pré‑ARNm, la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm. FBP2 interagit avec des éléments riches en AU et des motifs ARN riches en G, et module des programmes du métabolisme de l’ARN qui façonnent la différenciation cellulaire, les réponses au stress et les sorties de signalisation inflammatoire. Par ses fonctions dans le traitement et le renouvellement de l’ARN, KHSRP influence des voies liées à la prolifération et à l’apoptose, et une activité altérée de KHSRP a été associée à des signatures d’expression génique dérégulées observées dans des contextes de biologie du cancer, de dysfonction immunitaire et de maladies neurologiques. Ces propriétés font de KHSRP une cible utile pour disséquer les réseaux de régulation de l’ARN et leur impact sur les transitions d’état cellulaire.

FBP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KHSRP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FBP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KHSRP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KHSRP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FBP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KHSRP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FBP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FBP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de KHSRP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.