FBL7 Double Nickase Plasmid (h): sc-405043-NIC

FBXL7 (FBL7) kodiert ein F‑Box-Protein, das voraussichtlich als Substraterkennungskomponente von SCF‑(SKP1–CUL1–F‑box-)E3‑Ubiquitin-Ligasekomplexen fungiert und so ausgewählte Proteine gezielt der Ubiquitinierung und dem proteasomalen Abbau zuführt. Über diese Funktion ist FBXL7 mit zentralen Proteostase-Mechanismen verknüpft, die den Zellzyklus, Stressantworten und die Signaltransduktion prägen, indem sie die Stabilität von Signalweg-Regulatoren steuern. Störungen von Komponenten des Ubiquitin‑Proteasom-Systems und von F‑Box-Adaptorproteinen sind häufig mit fehlreguliertem Wachstum und veränderten Apoptoseschwellen assoziiert, wodurch FBXL7 in der mechanistischen Krebsbiologie und in verwandten Signalwegstudien von besonderem Interesse ist. Expression und genomische Veränderungen von FBXL7 wurden in verschiedenen Tumordatensätzen beschrieben, was seine Relevanz für die Untersuchung unterstreicht, wie ubiquitinvermittelte Proteinkontrolle krankheitsassoziierte zelluläre Phänotypen beeinflusst.

FBL7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FBXL7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FBXL7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FBXL7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FBXL7-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.