FBL4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407372

Übersicht

FBXL4 kodiert ein F-Box- und leucinreiches Repeat-Protein (FBL4), das als Substraterkennungskomponente von SCF-(SKP1–CUL1–F-Box)-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexen fungiert und dabei hilft, spezifische Proteine an Ubiquitinierung und proteasomalen Abbau zu koppeln. Durch regulierten Proteinabbau trägt FBL4 zu zellulären Proteostase-Programmen bei, die die mitochondriale Homöostase, den Energiestoffwechsel und Stressantworten beeinflussen. Pathogene Varianten in FBXL4 wurden mit schweren mitochondrialen enzephalomyopathischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die durch eine beeinträchtigte oxidative Phosphorylierung und eine gestörte Integrität des mitochondrialen Netzwerks gekennzeichnet sind. Diese Merkmale machen FBXL4 zu einem relevanten Ziel, um zu untersuchen, wie ubiquitinvermittelte Signalwege mit der mitochondrialen Biogenese und Qualitätskontrolle in humanen Zellen zusammenwirken.

Das FBL4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FBXL4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FBXL4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FBXL4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FBL4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FBXL4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FBL4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FBXL4-Exone abzielen, die für die FBL4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FBXL4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FBL4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FBL4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FBXL4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FBL4 HDR-Plasmid (h) und FBL4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FBXL4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FBXL4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.