FBL16 Double Nickase Plasmid (h): sc-414575-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FBL16 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FBL16 Double-Nickase-Plasmid (h) und FBL16 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FBXL16 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FBL16 Double Nickase Plasmid (h) | sc-414575-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FBL16 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-414575-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FBXL16 (FBL16) kodiert ein F-Box-Protein, dem eine Funktion als Substraterkennungskomponente von SCF-(SKP1–CUL1–RBX1)-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexen vorhergesagt wird und das dadurch den ubiquitinabhängigen proteasomalen Abbau von Zielproteinen beeinflusst. Über diese Rolle ist FBXL16 mit der Regulation der Proteinhomöostase und zellulären Signalausgaben verknüpft, die von der rechtzeitigen Degradation von Signalweg-Effektoren abhängen. Eine Modulation der SCF/F-Box-Aktivität kann den Zellzyklusverlauf, Stressantworten und Transkriptionsprogramme beeinflussen, indem sie die Stabilität regulatorischer Proteine verändert. Eine Fehlregulation von Komponenten des Ubiquitin-Proteasom-Systems, einschließlich F-Box-Adapterproteinen, ist häufig mit veränderten Signalzuständen verbunden, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit gestörter Proteostase beobachtet werden.
FBL16 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FBXL16-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FBXL16 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FBXL16-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FBXL16-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.