FBL10 Double Nickase Plasmid (h): sc-403232-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FBL10 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FBL10 Double-Nickase-Plasmid (h) und FBL10 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KDM2B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FBL10: sc-293279
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FBL10 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403232-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FBL10 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403232-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **KDM2B** kodiert das Protein **FBL10**, eine JmjC-Domänen-Histondemethylase und einen chromatinassoziierten Faktor, der die Erkennung von CpG-Inseln mit der Transkriptionsregulation verknüpft. FBL10 ist an der epigenetischen Kontrolle der Genexpression beteiligt, indem es Lysinreste an Histonen demethyliert und mit Polycomb-assoziierten Mechanismen koordiniert, wodurch Chromatinzugänglichkeit und entwicklungsbezogene Genprogramme beeinflusst werden. Durch die Modulation von Signalwegen, die Zellzyklusprogression, Differenzierung und die Aufrechterhaltung der zellulären Identität betreffen, trägt die Aktivität von KDM2B/FBL10 zur Ausprägung linienspezifischer transkriptioneller Zustände bei. Eine Fehlregulation von KDM2B wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, darunter onkogenes transkriptionelles Rewiring und veränderte stammzellartige Phänotypen, was es zu einem nützlichen Angriffspunkt für mechanistische Studien der epigenetischen Regulation macht.
FBL10 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KDM2B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KDM2B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KDM2B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KDM2B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.