Fatty Acid Synthase Double Nickase Plasmid (h): sc-400440-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Fatty Acid Synthase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Fatty Acid Synthase Double-Nickase-Plasmid (h) und Fatty Acid Synthase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FASN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Fatty Acid Synthase: sc-48357
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Fatty Acid Synthase Double Nickase Plasmid (h) | sc-400440-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fatty Acid Synthase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400440-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **FASN** kodiert die Fettsäuresynthase, einen multifunktionalen zytosolischen Enzymkomplex, der unter Verwendung von NADPH die de-novo-Synthese von Palmitat aus Acetyl-CoA und Malonyl-CoA katalysiert. Die FASN-Aktivität unterstützt die Lipidhomöostase, indem sie Fettsäuren für die Membranbiogenese, die Protein-Palmitoylierung und lipidbasierte Signalübertragung bereitstellt und so den Nährstoffstatus mit anabolen Wachstumsprogrammen verknüpft. FASN ist in zentrale Stoffwechselwege eingebunden, darunter der Citrat–Malat–Pyruvat-Shuttle, die NADPH-Produktion und SREBP-gesteuerte lipogene Transkriptionsnetzwerke, und reagiert auf Insulin- und mTOR-Signale. Eine fehlregulierte, FASN-abhängige Lipogenese wird breit in Zusammenhang mit Stoffwechselerkrankungen, adipositasassoziierter Entzündung, hepatischer Steatose sowie proliferativen Zuständen untersucht, in denen veränderte Lipidflüsse zelluläre Stressantworten und das Redoxgleichgewicht neu ausrichten können.
Fatty Acid Synthase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FASN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FASN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FASN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FASN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.