Fatty Acid Synthase CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400440-ACT

Das humane Gen **FASN** kodiert die Fettsäuresynthase, einen multifunktionalen zytosolischen Enzymkomplex, der die **de-novo-Synthese** langkettiger gesättigter Fettsäuren – vor allem **Palmitat** – aus **Acetyl‑CoA** und **Malonyl‑CoA** unter Verbrauch von **NADPH** katalysiert. Diese Aktivität ist mit dem Acetyl‑CoA‑Stoffwechsel, dem Citrat‑Shuttle und NADPH‑erzeugenden Signalwegen verknüpft und unterstützt die Membranbiogenese, die Protein‑Palmitoylierung sowie lipidbasierte Signalübertragung. Die Regulation von FASN ist eng an Nährstoffsensorik und lipogene Transkriptionsprogramme gekoppelt, einschließlich einer SREBP‑abhängigen Kontrolle, und trägt über Lipid‑Remodeling zu zellulären Antworten auf Hypoxie und oxidativen Stress bei. Veränderte FASN‑Expression und Lipogenese werden häufig im Kontext metabolischer Dysfunktionen und proliferativer Krankheitsbiologie untersucht, da die Lipidverfügbarkeit Wachstum, Stresstoleranz und inflammatorische Signalwege beeinflussen kann.

Fatty Acid Synthase Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FASN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Fatty Acid Synthase Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FASN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FASN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Fatty Acid Synthase-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FASN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Fatty Acid Synthase-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Fatty Acid Synthase-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FASN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.