FAST-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406686

Übersicht

FOXH1 kodiert den Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor FAST-1, einen nukleären Mediator der Signalübertragung der TGF-β-Superfamilie, der mit SMAD2/3‑SMAD4-Komplexen kooperiert, um die NODAL-/Activin-abhängige Transkription zu regulieren. FAST-1 bindet Forkhead-Motive in Zielpromotoren und integriert entwicklungsbiologische Signale, die über kontextabhängige Transkriptionsprogramme die Spezifikation des Mesendoderms, die Links-rechts-Patterning sowie epitheliale–mesenchymale Transitionen steuern. Eine fehlregulierte FOXH1-Aktivität wurde mit angeborenen Lateralisierungsdefekten und gestörter früher Embryonalentwicklung in Verbindung gebracht, und eine veränderte TGF-β/SMAD-abhängige Transkriptionsausgabe ist häufig mit onkogenen Prozessen wie Invasion und Metastasierung assoziiert. In Zellmodellen stellt FOXH1 einen gut untersuchbaren Knotenpunkt dar, um die Nutzung von SMAD-Kofaktoren, die Rekrutierung an Chromatin und das Pathway-Cross-Talk zu analysieren, die Differenzierung und Tumorzellplastizität beeinflussen.

Das FAST-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FOXH1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FOXH1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FOXH1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAST-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FOXH1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAST-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FOXH1-Exone abzielen, die für die FAST-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FOXH1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAST-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FAST-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FOXH1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAST-1 HDR-Plasmid (h) und FAST-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FOXH1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FOXH1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.