Particules Lentivirales d'Activation (m) FANCA: sc-420284-LAC

Le gène murin **Fanca** code la protéine FANCA, un composant essentiel de la voie de réparation de l’ADN de l’anémie de Fanconi (FA), qui protège l’intégrité du génome en situation de stress de réplication. FANCA participe à l’assemblage et au fonctionnement du complexe central FA, lequel favorise la monoubiquitination de FANCD2/FANCI, coordonnant la reconnaissance des pontages interbrins, la stabilisation des fourches de réplication couplée à la réparation, ainsi que l’interaction avec les facteurs de recombinaison homologue. La perturbation ou l’insuffisance des composants de la voie FA est associée à une instabilité chromosomique, à une hypersensibilité aux lésions induites par des agents de pontage de l’ADN, et à des syndromes d’insuffisance médullaire caractéristiques de l’anémie de Fanconi, faisant de **Fanca** un nœud clé pour l’étude des réponses au stress génotoxique. Dans les systèmes murins, la biologie de FANCA est fréquemment exploitée pour modéliser des mécanismes conservés de signalisation des dommages à l’ADN, de réparation associée à la réplication, ainsi que des phénotypes hématopoïétiques et du développement résultant d’une réparation déficiente des pontages interbrins.

Les particules d'activation lentivirales FANCA (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Fanca dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FANCA (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Fanca, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FANCA. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Fanca ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.