Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM83B (h): sc-415158

Présentation

FAM83B (famille présentant une similarité de séquence 83, membre B) est un adaptateur de signalisation cytoplasmique impliqué dans l’amplification des signaux en sortie des récepteurs à activité tyrosine kinase et dans l’activité en aval de la voie MAPK/ERK, soutenant des programmes de prolifération et de survie dans les cellules épithéliales. Il a été associé à la modulation de la dynamique de signalisation EGFR/RAS et à des interactions avec des processus liés à PI3K, influençant les réponses transcriptionnelles et la progression du cycle cellulaire. Une expression dérégulée de FAM83B a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est étudiée comme contributrice à la robustesse de la signalisation oncogénique, à des phénotypes de tolérance aux thérapies et à une dépendance modifiée aux facteurs de croissance. Ces caractéristiques font de FAM83B un nœud utile pour disséquer l’architecture des voies de signalisation, le contrôle par rétroaction et les relations génotype–phénotype dans des modèles de biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM83B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FAM83B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FAM83B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FAM83B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM83B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FAM83B pour l'étude de la signalisation de FAM83B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FAM83B essentiels à la fonction de FAM83B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FAM83B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM83B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAM83B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FAM83B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM83B plasmide HDR (h) et le FAM83B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FAM83B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FAM83B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.