Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM72A (h): sc-409422

Présentation

FAM72A code une protéine restreinte aux vertébrés, associée à des programmes liés au cycle cellulaire et à des états prolifératifs, avec une expression enrichie dans les cellules en division et les tissus neuraux en développement. Bien que son mécanisme moléculaire soit encore en cours de caractérisation, FAM72A a été associée à la régulation de la stabilité du génome et à des processus liés aux dommages de l’ADN, en interface avec les réponses au stress de réplication. Des études transcriptomiques et génomiques rapportent fréquemment une expression altérée de FAM72A dans de multiples types de tumeurs, ce qui est cohérent avec un rôle dans la prolifération oncogénique et la plasticité de lignée. Ces observations font de FAM72A une cible utile pour étudier le contrôle du cycle cellulaire, les dépendances aux voies de réparation de l’ADN et des biomarqueurs de populations cellulaires hautement prolifératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM72A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FAM72A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FAM72A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FAM72A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM72A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FAM72A pour l'étude de la signalisation de FAM72A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FAM72A essentiels à la fonction de FAM72A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FAM72A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM72A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAM72A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FAM72A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM72A plasmide HDR (h) et le FAM72A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FAM72A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FAM72A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.