Plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM148C (h): sc-414279

Présentation

C2CD4C (FAM148C) code une protéine contenant un domaine C2, impliquée dans la signalisation membranaire associée au calcium et dans la régulation des interactions protéine–protéine au niveau des membranes intracellulaires. Des annotations fonctionnelles émergentes relient FAM148C à des voies coordonnant le trafic vésiculaire, la dynamique du cytosquelette et des programmes transcriptionnels répondant aux stimuli, qui influencent la croissance cellulaire et l’homéostasie métabolique. Des études génétiques ont associé des variations au locus C2CD4C à des traits glycémiques et au risque de diabète de type 2, ce qui appuie l’exploration de ses rôles dans la fonction des îlots pancréatiques et, plus largement, dans les réseaux de signalisation endocriniens. Ces caractéristiques font de FAM148C une cible pertinente pour des études mécanistiques sur l’intégration des signaux et les relations génotype–phénotype dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM148C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C2CD4C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C2CD4C, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C2CD4C à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FAM148C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C2CD4C pour l'étude de la signalisation de FAM148C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C2CD4C essentiels à la fonction de FAM148C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C2CD4C pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FAM148C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FAM148C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus C2CD4C. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FAM148C plasmide HDR (h) et le FAM148C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C2CD4C pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C2CD4C définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.