FAIM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423872

Übersicht

Faim kodiert den Fas-apoptosehemmenden Faktor (FAIM), einen zytoprotektiven Faktor, der die durch Todesrezeptoren ausgelöste Apoptose abschwächt und zelluläre Überlebenssignale als Antwort auf Signale der Fas/TNFR-Familie moduliert. In Mauszellen wurde FAIM mit der Regulation der Caspase-Aktivierung, von Stressantworten sowie von Überlebenswegen wie NF-κB und PI3K/AKT in Verbindung gebracht und beeinflusst damit die Ergebnisse von Immunaktivierung und Gewebehomöostase. Eine veränderte FAIM-Aktivität wurde mit einer fehlregulierten Lymphozyten-Überlebensfähigkeit, erhöhter Empfindlichkeit gegenüber neurodegenerativem Stress und inflammatorischen Phänotypen assoziiert, was FAIM für die Untersuchung der Apoptosekontrolle und von Zellschicksalsentscheidungen relevant macht. Die funktionelle Analyse von Faim unterstützt mechanistische Arbeiten in der Immunologie, Neurobiologie und in Signalwegen, die die Resistenz gegenüber extrinsischen apoptotischen Stimuli steuern.

Das FAIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Faim-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Faim-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Faim nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAIM-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Faim-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAIM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Faim-Exone abzielen, die für die FAIM-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Faim-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FAIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Faim-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAIM HDR-Plasmid (m) und FAIM HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Faim-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Faim-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.