FADS6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435879

Panoramica

La desaturasi degli acidi grassi 6 (FADS6) è un enzima associato alla membrana implicato nell’introduzione di doppi legami negli acidi grassi polinsaturi, influenzando la composizione lipidica e la segnalazione lipidica a valle. Modellando i pool di acidi grassi bioattivi e dei loro derivati, FADS6 può incidere sulla fluidità di membrana, sulla funzione degli organelli e sull’omeostasi metabolica in cellule e tessuti murini. L’attività correlata a Fads6 si interseca con reti più ampie di desaturazione ed elongazione degli acidi grassi che coordinano il bilancio energetico e la disponibilità di mediatori dell’infiammazione. La disregolazione delle vie lipidiche legate alle desaturasi è spesso studiata nel contesto dello stress metabolico, dell’accumulo lipidico epatico, dei fabbisogni lipidici del neurosviluppo e di fenotipi infiammatori in modelli preclinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FADS6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fads6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fads6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fads6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FADS6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fads6 per lo studio della segnalazione di FADS6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fads6 critici per la funzione di FADS6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fads6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FADS6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FADS6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fads6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FADS6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FADS6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fads6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fads6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.