Plásmido CRISPR de Activación (m) FADS1: sc-429289-ACT

Mouse **Fads1** codifica la desaturasa de ácidos grasos 1 (**FADS1**), una **Δ5-desaturasa microsomal** que cataliza etapas clave en la biosíntesis de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga a partir de ácidos grasos esenciales de la dieta. Al regular los reservorios celulares de precursores del ácido araquidónico y del ácido eicosapentaenoico, **FADS1** influye en la composición lipídica de las membranas y en la disponibilidad de sustratos para la producción de eicosanoides y mediadores especializados pro-resolutivos. La actividad de **Fads1** se integra en redes metabólicas lipídicas que incluyen la señalización de **PPAR**, la remodelación de fosfolípidos y cascadas de señalización inflamatoria. La capacidad de desaturación desregulada se ha relacionado con una homeostasis metabólica alterada y fenotipos asociados a la inflamación, lo que convierte a **Fads1** en un objetivo relevante para estudios sobre señalización impulsada por lípidos y mecanismos de enfermedad en modelos murinos.

FADS1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fads1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FADS1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fads1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fads1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FADS1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fads1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FADS1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FADS1 en células tumorales con expresión de Fads1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.