Plasmide CRISPR d'Activation (h) Factor IX: sc-402469-ACT

Le gène humain **F9** code le **facteur IX** de la coagulation, un zymogène de **sérine protéase** dépendant de la **vitamine K**, produit principalement par les **hépatocytes** et sécrété dans le plasma en tant que composant clé de la **cascade de coagulation intrinsèque**. Après activation en **facteur IXa**, il s’assemble avec le **facteur VIIIa** à la surface de phospholipides pour former le **complexe ténase intrinsèque**, qui catalyse l’activation du **facteur X** et propage la génération de **thrombine**. L’activité de **F9** est régulée par la **γ-carboxylation** post-traductionnelle et par une liaison membranaire **dépendante du calcium**, intégrant les voies de biosynthèse hépatiques aux signaux de l’hémostase. Des altérations génétiques ou fonctionnelles de **F9** sont fortement associées à des troubles de la coagulation, ce qui en fait un locus largement utilisé pour étudier la régulation génique hépatique, la maturation des protéases sécrétées et le contrôle, à l’échelle des voies, de la coagulation.

Factor IX Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de F9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Factor IX Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus F9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription F9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Factor IX. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus F9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Factor IX au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Factor IX dans les cellules tumorales présentant une expression de F9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.