EYA4 Double Nickase Plasmid (h): sc-404355-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EYA4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EYA4 Double-Nickase-Plasmid (h) und EYA4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EYA4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EYA4: sc-393111
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EYA4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404355-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EYA4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404355-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EYA4 kodiert ein Mitglied der Eyes-Absent-(EYA)-Familie von transkriptionellen Koaktivatoren und haloacid-dehalogenaseähnlichen Phosphatasen, die an der Signalübertragung zwischen Zellkern und Zytoplasma beteiligt sind. EYA4 wirkt an entwicklungsbezogenen Programmen der Genregulation mit, indem es Protein-Tyrosinphosphatase-Aktivität mit Interaktionen koppelt, die die Aktivität von Transkriptionsfaktoren und chromatinassoziierten Komplexen modulieren. In der Humanbiologie wird EYA4 mit sensorischen und kardialen Phänotypen in Verbindung gebracht; genetische Varianten sind mit autosomal-dominantem Hörverlust assoziiert, und es wurden Zusammenhänge mit kardiomyopathiebezogenen Prozessen beschrieben. Seine Funktionen bei der Festlegung von Zellschicksalen und der stressresponsiven Transkription machen EYA4 zu einem nützlichen Ziel, um regulatorische Netzwerke in Differenzierung sowie krankheitsrelevanten Zellmodellen zu untersuchen.
EYA4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EYA4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EYA4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EYA4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EYA4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.