EYA4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404355

Übersicht

EYA4 kodiert ein Mitglied der Eyes-Absent-(EYA)-Proteinfamilie, das als transkriptioneller Koaktivator und als Phosphatase wirkt und dabei entwicklungsbezogene sowie stressresponsive Signalprogramme integriert. Über seine Interaktionen mit SIX- und DACH-Proteinen trägt EYA4 zu genregulatorischen Netzwerken bei, die Zellschicksalsentscheidungen, Differenzierung und gewebespezifische Morphogenese steuern. Die Tyrosinphosphatase-Aktivität des Proteins wird mit der Modulation von DNA-Schadensantworten und anderen phosphorylierungsabhängigen Prozessen in Verbindung gebracht, die die zelluläre Homöostase prägen. Eine veränderte EYA4-Expression oder genomische Störung ist mit sensorischen und kardialen Phänotypen assoziiert und wurde zudem in Studien zur tumorassoziierten epigenetischen Stilllegung beschrieben, was seine Relevanz für mechanistische Untersuchungen in Modellen menschlicher Erkrankungen unterstreicht.

Das EYA4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EYA4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EYA4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EYA4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EYA4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EYA4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EYA4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EYA4-Exone abzielen, die für die EYA4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EYA4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EYA4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EYA4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EYA4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EYA4 HDR-Plasmid (h) und EYA4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EYA4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EYA4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.