EYA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403115-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EYA2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EYA2 Double Nickase Plasmid (h) e il EYA2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EYA2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EYA2 Antibody (F-18): sc-100325
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EYA2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403115-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EYA2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403115-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EYA2 codifica Eyes Absent homolog 2, un coattivatore trascrizionale multifunzionale e una fosfatasi di tipo haloacid dehalogenase–like, che regola programmi di espressione genica coinvolti nello sviluppo e nell’omeostasi. Attraverso interazioni con i fattori di trascrizione della famiglia SIX e la modulazione degli stati di fosforilazione della tirosina, EYA2 contribuisce alle decisioni sul destino cellulare, alla proliferazione, alla migrazione e alla segnalazione associata al danno al DNA. Le reti collegate a EYA2 si intersecano con vie dell’organogenesi e circuiti di controllo trascrizionale che modellano i fenotipi epiteliali e mesenchimali. Un’espressione o un’attività deregolata di EYA2 è stata riportata in molteplici contesti associati a malattia, rendendolo un bersaglio utile per analizzare la riconfigurazione delle vie di segnalazione e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli cellulari umani.
EYA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EYA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EYA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EYA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EYA2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.