EXTL1 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-409470-LAC-2

Das humane Gen EXTL1 kodiert die exostosinähnliche Glykosyltransferase 1, ein Golgi-assoziiertes Enzym, das an der Biosynthese und Verlängerung von Heparansulfatketten auf Proteoglykanen beteiligt ist und dadurch die Zusammensetzung der extrazellulären Matrix sowie die Funktion von Co-Rezeptoren auf der Zelloberfläche mitprägt. Über seine Rolle beim Aufbau von Heparansulfat beeinflusst EXTL1 zentrale Signalnetzwerke wie die FGF-, WNT- und Hedgehog-Signalwege, die von der glykosaminoglykanvermittelten Verteilung von Liganden und der Rezeptorbindung abhängen. Eine Fehlregulation des Heparansulfatstoffwechsels, einschließlich veränderter EXTL1-Aktivität, wurde mit Störungen von Entwicklungsprozessen sowie mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch abweichende Zellkommunikation und Matrix-Remodelling gekennzeichnet sind. Gen-Editing von EXTL1 oder funktionelle Eingriffe in seine Aktivität ermöglichen mechanistische Untersuchungen glykosylierungsabhängiger Signalgebung, der Proteoglykanbiologie und signalwegspezifischer Ausleseparameter in humanen Zellmodellen.

EXTL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente EXTL1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

EXTL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der EXTL1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen EXTL1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen EXTL1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.