Ets-1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423870-ACT

Ets1 kodiert den ETS-Familien-Transkriptionsfaktor Ets-1, einen zentralen Regulator von Genexpressionsprogrammen, die Zelldifferenzierung, Proliferation und Überleben steuern. In Mauszellen integriert Ets-1 Signale aus MAPK/ERK- und verwandten Kinasekaskaden, um die Aktivität von Enhancern und Promotoren zu modulieren, die Zytokinantworten, den Umbau der extrazellulären Matrix und linienspezifische transkriptionelle Netzwerke kontrollieren. Ets-1 ist in der Immunbiologie breit untersucht, insbesondere aufgrund seiner Funktionen in der Entwicklung und Aktivierung von T- und B-Zellen, sowie in vaskulären und stromalen Kontexten, in denen es angiogene und migratorische Phänotypen beeinflusst. Eine fehlregulierte ETS1-Aktivität wird mit inflammatorischen und autoimmunen Phänotypen sowie mit onkogener transkriptioneller Reprogrammierung in Verbindung gebracht, was Ets-1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen und Gennetzwerken macht.

Ets-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ets1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ets-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ets1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ets1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ets-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ets1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ets-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ets-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ets1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.