Partículas Lentivirales de Activación (m) ETAR: sc-420111-LAC

Ednra en el ratón codifica el receptor de endotelina tipo A (ETAR), un receptor acoplado a proteína G que se une de forma preferente a la endotelina-1 para regular la vasoconstricción, la proliferación del músculo liso y la remodelación de la matriz extracelular. La señalización de ETAR se acopla principalmente a Gq/11 para activar la fosfolipasa C, la movilización de Ca2+ y la PKC, con activación posterior de las vías MAPK/ERK, RhoA/ROCK y PI3K/AKT, que determinan el tono vascular y la remodelación tisular. Durante el desarrollo, Ednra es esencial para el patrón craneofacial y cardiovascular derivado de la cresta neural, y su desregulación se utiliza para modelar mecanismos subyacentes a la hipertensión pulmonar, la fibrosis y la remodelación vascular inflamatoria. Estas características hacen de Ednra/ETAR un nodo útil para estudiar la integración de señales de GPCR, los programas génicos contráctiles y el crosstalk de la vía de la endotelina en sistemas celulares endoteliales, de músculo liso y estromales.

Las partículas de activación lentiviral ETAR (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Ednra en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ETAR (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Ednra, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ETAR. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Ednra y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.