Plasmide CRISPR d'Activation (h) ETAR: sc-401000-ACT

EDNRA code pour le récepteur de l’endothéline de type A (ETAR), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie préférentiellement à l’endothéline‑1 afin de réguler la vasoconstriction et le tonus du muscle lisse vasculaire. La signalisation d’ETAR mobilise principalement Gq/11 pour activer la phospholipase C, augmenter le Ca2+ intracellulaire et stimuler des voies dépendantes de la PKC, avec des effets en aval sur MAPK/ERK et Rho/ROCK qui influencent la contraction, la prolifération et le remodelage de la matrice extracellulaire. Dans les contextes endothéliaux et stromaux, l’activité d’EDNRA s’articule avec des signaux d’hypoxie et d’inflammation qui façonnent les réponses angiogéniques et fibrotiques. Une expression ou une signalisation dérégulée d’EDNRA a été associée au remodelage cardiovasculaire et vasculaire pulmonaire, à l’hypertension systémique et à la biologie du stroma associé aux tumeurs, ce qui étaye son intérêt comme cible mécanistique dans des recherches centrées sur les voies de signalisation.

ETAR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EDNRA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ETAR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EDNRA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EDNRA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ETAR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EDNRA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ETAR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ETAR dans les cellules tumorales présentant une expression de EDNRA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.