Plasmide Double Nickase (h) Estrogen Receptor beta: sc-400213-NIC

L’ESR2 humain code le récepteur des œstrogènes bêta (ERβ), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui régule des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération cellulaire, la différenciation, l’apoptose et la modulation immunitaire en réponse aux œstrogènes et à des ligands apparentés. ERβ agit via des éléments de réponse aux œstrogènes classiques ainsi que par des interactions « tethered » (ancrées) avec des facteurs de transcription, intégrant les signaux des voies MAPK et PI3K-AKT et le remodelage de la chromatine afin de façonner une expression génique dépendante du contexte. Dans de nombreux tissus, ERβ contrebalance la transcription pilotée par ERα et contribue à l’homéostasie épithéliale, à la fonction mitochondriale et à la signalisation inflammatoire. Une activité d’ESR2 dérégulée ou une expression altérée d’ERβ a été associée à des cancers hormono-dépendants, à des phénotypes reproductifs et métaboliques, ainsi qu’à des processus neuro-inflammatoires, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques de la signalisation des œstrogènes.

Estrogen Receptor beta Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ESR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ESR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ESR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ESR2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.