ESM-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403120-ACT

ESM1 codifica a molécula 1 específica de células endoteliais (ESM-1/endocan), um proteoglicano secretado de sulfato de dermatana, expresso predominantemente pelo endotélio vascular e induzido por citocinas inflamatórias. A ESM-1 modula a ativação endotelial ao influenciar as interações leucócito–endotélio, a permeabilidade vascular e a sinalização associada à matriz extracelular, conectando-se a vias angiogênicas e inflamatórias. Ela tem sido associada à angiogênese relacionada a tumores e ao remodelamento vascular inflamatório, e sua expressão se correlaciona com disfunção endotelial em múltiplos contextos de doença. Essas características tornam o ESM1 uma ferramenta molecular útil para estudar a biologia endotelial, o crosstalk com o microambiente e biomarcadores de ativação vascular em sistemas celulares humanos.

ESM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ESM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ESM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ESM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ESM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ESM-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ESM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ESM-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ESM-1 em células tumorais com expressão de ESM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.