Plasmide CRISPR d'Activation (h) ESE-1: sc-403728-ACT

ELF3 code pour ESE-1, un facteur de transcription de la famille ETS, restreint aux épithéliums, qui régule l’expression de gènes spécifiques de lignée ainsi que des programmes de différenciation dans les tissus barrières. ESE-1 intègre des signaux issus des voies inflammatoires et de réponse au stress afin de moduler des réseaux transcriptionnels contrôlant la polarité cellulaire, l’organisation des jonctions et la prolifération, avec des interactions rapportées avec les circuits de régulation associés à MAPK/ERK et à NF-κB. Une activité d’ELF3 dérégulée a été associée à une altération de l’homéostasie épithéliale et à des modifications d’états transcriptionnels liés aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la reprogrammation oncogénique, de phénotypes associés à l’invasion et des interactions épithélium–système immunitaire. En tant que régulateur se liant à l’ADN, ESE-1 constitue un nœud exploitable pour disséquer la logique des promoteurs/activateurs (enhancers) et des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte dans des modèles cellulaires humains.

ESE-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELF3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ESE-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELF3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELF3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ESE-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELF3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ESE-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ESE-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ELF3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.