Plasmide Double Nickase (h) Erythropoietin/EPO: sc-400283-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Erythropoietin/EPO correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Erythropoietin/EPO Double Nickase (h) et le plasmide Erythropoietin/EPO Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EPO. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Erythropoietin/EPO Antibody (7D10): sc-80995
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Erythropoietin/EPO | sc-400283-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Erythropoietin/EPO | sc-400283-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’EPO humaine code l’érythropoïétine, une hormone glycoprotéique sécrétée qui régule la survie, la prolifération et la différenciation des progéniteurs érythroïdes via l’activation d’EPOR et la signalisation JAK2/STAT5 en aval. Cette voie s’intègre aux cascades PI3K–AKT et MAPK pour coordonner des programmes anti-apoptotiques et la production érythropoïétique sous stress hypoxique, notamment via un contrôle transcriptionnel assuré par les facteurs HIF. Au-delà de l’hématopoïèse, la signalisation EPO/EPOR sert de modèle pour étudier la biologie des récepteurs de cytokines, les réseaux transcriptionnels de réponse au stress et la dynamique des facteurs sécrétés dans le dialogue intercellulaire. Une expression ou une signalisation EPO dérégulée est fréquemment étudiée dans le cadre de la biologie de l’anémie, du remodelage associé à l’hypoxie et de l’adaptation du microenvironnement tumoral lorsque les voies de détection de l’oxygène sont perturbées.
Erythropoietin/EPO Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPO.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.