Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400283

Übersicht

EPO kodiert Erythropoetin, ein sezerniertes glykosyliertes Proteohormon, das das Überleben, die Proliferation und die Differenzierung erythroider Vorläuferzellen vor allem über EPOR-vermittelte JAK2/STAT5-Signalgebung reguliert, mit zusätzlicher Beteiligung der PI3K/AKT- und MAPK-Signalwege. In der erwachsenen Physiologie wird die EPO-Produktion über die Sauerstoffsensorik durch HIF-gesteuerte Transkriptionsprogramme streng kontrolliert und verknüpft so Hypoxie mit der systemischen Homöostase der roten Blutkörperchen. Eine fehlregulierte Aktivität der EPO/EPOR-Achse ist für die Mechanismen von Anämie und hypoxieassoziierten Reaktionen relevant und wird häufig im Rahmen umfassenderer Studien zu Eisenstoffwechsel, Entzündung und Gewebeoxygenierung untersucht. Da EPO ein sezernierter Faktor ist, eignen sich seine Genregulation und die nachgeschalteten Signaleffekte zudem als aussagekräftige Readouts für transkriptionelle Kontrolle, Crosstalk in der Zytokinsignalgebung und die zelluläre Anpassung an Sauerstoffmangelstress.

Das Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EPO-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EPO-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EPO nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Erythropoietin/EPO-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EPO-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Erythropoietin/EPO-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EPO-Exone abzielen, die für die Erythropoietin/EPO-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EPO-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EPO-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Erythropoietin/EPO HDR-Plasmid (h) und Erythropoietin/EPO HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EPO-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EPO-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.