ERRβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424021

Übersicht

Der Östrogen-verwandte Rezeptor Beta (ERRβ), kodiert durch das Mausgen *Esrrb*, ist ein verwaister nukleärer Rezeptor, der als Transkriptionsfaktor wirkt und Genprogramme koordiniert, die am Energiestoffwechsel, an der mitochondrialen Funktion und an Zellschicksalsentscheidungen beteiligt sind. In pluripotenten Zellen trägt *Esrrb* zur Aufrechterhaltung der Selbsterneuerung bei und ist in zentrale transkriptionelle Netzwerke eingebunden, die Differenzierung und Linienfestlegung regulieren. Die ERRβ-Aktivität steht in Verbindung mit der Signalübertragung von Steroidhormonrezeptoren sowie mit einer übergeordneten transkriptionellen Kontrolle oxidativer und entwicklungsbezogener Signalwege. Eine Fehlregulation der *Esrrb*-abhängigen Transkription wurde mit veränderten Entwicklungsergebnissen und kontextabhängigen Veränderungen der zellulären Proliferation und des Stoffwechselzustands in Zusammenhang gebracht, was *Esrrb* als mechanistischen Knotenpunkt in krankheitsrelevanten Modellen stützt.

Das ERRβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Esrrb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Esrrb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Esrrb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ERRβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Esrrb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ERRβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Esrrb-Exone abzielen, die für die ERRβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Esrrb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ERRβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ERRβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Esrrb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ERRβ HDR-Plasmid (m) und ERRβ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Esrrb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Esrrb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.